细胞冻存袋操作需要注意?
1.细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15m培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
2.复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。
3.加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度,从如果你加培养基的太少,那么DMSO的浓度就会比较大,就会影响 细胞生长,从以前的资料来看,DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是 10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
细胞冻存步骤
1.用移液器吸走原培养基,加入适量PBS洗1-2遍;
2.加入适量胰酶,置于培养箱中消化;
3.待消化到位后加入适量血浆或完全培养基终止消化,CS250冻存袋哪家好,800-1000rpm离心3-5min;
4.配制冻存液,待细胞离心后去上清,加入冻存液重悬,调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/mL,转移到冻存管中;
5.将冻存管放入程序降温盒中,CS50冻存袋哪家好,-80度过夜,然后转移到液氮中保存。
6.冻存细胞后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,
为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存
冻存袋的使用注意事项
1. 如用液氮罐存放样品,包裹组织的铝箔或冷冻保存管转入样本袋时,请按以下步骤进行:把样本袋(纱布袋等)放入液氮中冷冻一下,而后将液氮冷却的组织放入样本袋
2. 如用广口容器液氮暂存,建议用进口高质量冻存管,油性笔标记后,样品迅速放入管中,拧紧后迅速放入液氮中。然后再转移到超低温冰箱中保存。
3.直接干冰中保存并邮寄的,冻存袋哪家好,建议全部用进口冻存管,油性笔标记后,样品迅速放入经干冰预冷的冻存管中,放入样品袋,200-074-401冻存袋哪家好,埋入干冰中,密封包装后,运输。
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