石蜡包埋切片实验基本步骤主要有以下几步:
1、取材:新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-I5-10min-II5-10min-蜡I1h-蜡II1h-蜡III 1h。
3、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,病理切片技术服务,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。
4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。切片漂浮于摊片机40℃温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。
常见的生物切片一般有三种,徒手切片、石蜡切片、火棉胶切片三种。徒手切片法简单省时间,容易掌握,虽有局限性,石蜡切片法所使用的支持剂是石蜡,优点是切下的片子薄而匀,还能作连续切片,但制作手续较复杂,具体可分为固定、冲洗、脱水、染色、浸蜡、切片、透明和封藏八步进行操作。火棉胶切片法所使用的支持剂是火棉胶。这种方法的优点是包埋过程不经高温,可以避免组织收缩及变脆,适用精细材料(如脑)的切片,适于大块组织及多空洞的组织(如脑、眼球)的切片。病理切片是病理中重要的一个环节,以往病理医生观察病理切片,是根据组织学形态,做出明确的病理诊断。
随着分子诊断技术的进展,完整的病理诊断不仅包含分子诊断,还包括基因检测和后续的靶向治1疗,所以病理切片是病理诊断的关键一步。病理医生可以选择相应的分子诊断,通过一些特殊的分子检测做病理切片进行分级和分类。必要时还可以进行基因的筛选,对患者靶向药1物的治1疗提供帮助。
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