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外泌体研究开展的如火如荼。不论是 SCI 文章的发表还是各类基1金的申请,外泌体相关研究表现都非常亮眼。外泌体提取后,研究人员面临的一个重要问题就是,我提取的是不是外泌体?如果是的话,质量如何?

现阶段,对外泌体进行鉴定主要有三种主流的方法:电镜、粒径和 Western blot 分析靶标物。之前我们已经对外泌体电镜进行了总结,今天我们来看看外泌体的粒径分析。

外泌体粒径分析原理

外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle tracking Analysis, NT A),其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析,结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休1克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。

外泌体的提取方式:

1、离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。

2、过滤离心:这种操作简单、省时,exo技术服务,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。

3、密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂

4、免1疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。

5、色谱法:此种方法分离出的外泌体大小均一,但设备特殊,应用不广泛。

如果癌细胞来源的外泌体进入单核细胞,通过外泌体内所含的TGF-β或前1列腺素E2等的作用,单核细胞会被诱导分化为髓源性免1疫抑制细胞。髓源性免1疫抑制细胞释放出IL-10等各种免1疫抑制分子,抑制免1疫细胞活化或抑制T细胞的诱导,从而抑制抗肿1瘤免1疫。癌细胞通过利用抑制免1疫细胞攻击自身这一机制,进而促进癌1症的发展。

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