原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精1确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交的特点是杂交在显微镜载玻片上中期染色体标本上进行。所谓原位即指标本上DNA原位变性,在利用放1射性或非放1射性标记的已知核酸探针杂交后,通过放1射自显影或非放1射性检测体系来检测染色体上特异DNA或RNA顺序,可用放1射性颗粒在某条染色体的区带出现的频率或荧光的强弱来确定探针的位置,从而进行准确的基因定位。
结1核病是严重威胁人类健康的传1染性疾病,每年约有200万人死于该病,其死1亡率在传1染性疾病中仅低于艾1滋病,随着医1疗诊断技术的迅猛发展,结1核病病理诊断经历了单一形态学和联合特殊染色,到如今利用分子病理基因检测技术进行准确诊断的三个阶段。
我科早在全1国建立了系统性结1核病分子病理诊断技术的平台,率1先将分子病理诊断技术在结1核病中应用并推广,解决了传统病理对菌阴肺结1核及肺外结1核病的诊断率低、结1核病与非结1核分枝杆1菌病无法鉴别以及耐药结1核病无法诊断等难题。同时,我科作为中华医学会结1核病学分会金1牌病理培训基地,负责组织制定了结1核病病理诊断规范、培训了大量的专1业技术人员,为形成结1核病病理学综合诊治新模式做出了卓1越贡献!
既要充分保留被测核酸,(特别是RNA)不被降解,又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。
步骤:基本与免1疫组织化学技术相似,即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),植物基因组原位杂交测试服务,含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经RNA酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳,40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃超低温冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存数月之久。
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