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湖北ISH-贝科新肽

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在进行亚细胞定位研究时,研究者通常会使用荧光标记技术。这种技术利用特殊的标记目标蛋白质或细胞成分,然后将与荧光染料连接起来,这样就可以在显微镜下观察到目标蛋白质或细胞成分的位置和动态。

在植物学研究中,亚细胞定位也被广泛应用于研究。通过将外源基因导入植物细胞,并利用亚细胞定位技术来确定这些基因在植物细胞中的表达位置,可以帮助科学家们理解这些基因的功能和作用机制。

总之,亚细胞定位是植物学研究中的一个重要领域。它可以帮助科学家们理解植物细胞的生物学特性和功能,同时也可以应用于研究和疾病等方面。随着技术的不断发展和进步,相信亚细胞定位技术将会在植物学研究中发挥越来越重要的作用。

亚细胞定位操作步骤

1、通过一些在线网站预测亚细胞定位

2、亚细胞定位载体构建

(1)引物设计:利用引物设计软件,ISH,根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。

(2)载体构建:将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS,得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。

3、细胞转染

当细胞生长到对数生长期时,接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿(35mm petri dish,10 mm Microwell)中,培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时,将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。

4、激光扫描共聚焦显微镜观察

将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点,根据实验需求选择对应激发波长(常用405nm、488nm和561nm),使用共聚焦显微镜观察,采取图像。

为什么不先对基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?

不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。

适用于什么实验场景?

(1)基因功能研究,文章里总少不了这一项。

(2)研究蛋白相互作用,与酵母双杂实验结果相互验证。

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