实验室采用Zetaview(品牌:Particle Metrix)进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA),原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析,结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一;相较于其他表征方式,NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。Zetaview包含的微电泳技术,也可进行zeta电位的检测。
目前配备为488nm波长的激光器,且搭配对应的滤光片,可以测量荧光抗1体标记的外泌体。
在透射电镜基础上,胞外囊泡NTA检测,用外泌体标记蛋白对外泌体进行免1疫标记,利用胶体金标记出外泌体表面的特定抗原的位置。结合透射电镜形态学定性的特点,同时确定外泌体标记蛋白的位置。这样同时从形态学及免1疫学原理上验证外泌体。这样数据结果中既可以获得经典形态的外泌体,又可以定性及定位外泌体表面的标志蛋白。这样具有更充分的说服力。外泌体不仅含有蛋白质抗原,还含有分泌细胞来源的mRNA或non-coding RNA(特别是miRNA),其功能引起广泛关注。外泌体的脂质双分子层膜可保护这些RNA,不被RNase分解,在血液、体液中稳定存在。在外泌体及其分泌细胞中均可检测出RNA,也存在仅能在其中之一检测出RNA的情况,因此我们设想存在一种可以选择性将特定的RNA吸收至外泌体的机制。
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