外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,外泌体电镜,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,外泌体电镜技术服务,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,外泌体电镜测试服务,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
外泌体(Exosome)指包含了复杂RNA和蛋白质的膜性囊泡,其直径在30-150nm左右。存在于所有生物体液中,包括血液、唾液、尿液、滑液、羊水、细胞培养液等。不论是正常细胞还是肿1瘤细胞,都能够产生外泌体。 外泌体富含胆固醇和鞘磷脂,具有脂质双分子层结构;此外,外泌体还含有蛋白质和核酸。不同细胞来源的外泌体中所含有的生物分子具有细胞种属特异性,其外泌体特异性与来源细胞相符合。除了用NTA方法,该团队另基于acetylcholinesterase(一种已知的外泌体表达蛋白)评估三种试剂盒提取外泌体的得率。从NTA结果看,对于血1清和血浆样本,Exo-spin的提取量高,是其他两种试剂盒的1-3倍;相对来说,脑脊髓液的提取率都比较低,ExoQuick?提取得到的外泌体浓度低。从基于acetylcholinesterase的分析结果看,其数值高于NTA方法,且Exo-spin得到的外泌体浓度高于其他两种试剂盒。
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