武汉科锐诺生物(多图)-分子病理技术服务
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武汉科锐诺生物科技有限公司
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(王经理 先生)
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分子病理学诊断主要应用于以下几个方面:1、对于肿l瘤易感基因的检测,对于肿l瘤高危人群的筛检具有实用价值,如检测GSTπ基因以判定个体暴露于致癌物是的致癌危险性。2、肿l瘤相关病毒的检测,如采用原位杂交方法检测标本中HPV、EBER等病毒。3、疑难肿l瘤的诊断和分类,尤其在鉴别诊断淋巴细胞增l生性疾病与淋巴细胞性肿l瘤上有着强大的特异性和可靠性。4、肿l瘤的个体化治l疗,能够根据肿l瘤发生l发展不同阶段分子水平的特点,对肿l瘤的个体化和预见性治l疗具有指导意义。5、肿l瘤的预后判断,如采用荧光原位杂交技术(FISH)检测HER-2基因在乳l腺l癌病例中的表达情况,配合术后治l疗,指导临床用药选择。
.杂交 (1) 盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。(5) 将32 P标记的双链DNA探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。
既要充分保留被测核酸,(特别是RNA)不被降解,分子病理技术服务,又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。
步骤:基本与免1疫组织化学技术相似,即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经RNA酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳,40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃超低温冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存数月之久。
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