常见的生物切片,厚度一般在几微米的程度,这种厚度制作起来比较简单,除了可以使用自动化的设备来切片之外,手动操作也能切到这种厚度,而且完够满足光学显微镜下观察的标准。不过在前沿的科研领域里,需要观察更细微的细胞结构,甚至需要从分子的层面来进行研究,这时候就需要用到电子显微镜。然而电子显微镜也需要更薄的样品,切片至少要达到0.1微米的厚度,而这种切片也就被称为是超薄切片,在很多实验研究里需要厚度达到50纳米,显然手I操作是无法达到这种厚度的。那么在实验环境下是怎样做成这种超薄生物切片的呢?首先是需要进行更好的固定,因为在如此薄的尺度之下,不但基本的细胞结构都已经被完全破坏,而且其中的细胞器也都被切开,里面的生物酶会释放出来,并且在很短的时间内使细胞结构遭到破坏。所以就需要在取得样品之后尽快进行固定,要求在一-分钟之 内完成这项操作,然后再使用对应的材料来做透明化以及包埋,接下来还需要配合的切片机来完成切片的过程,从而达到理想的厚度。
石蜡包埋介绍取材:新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将即将操作部位组织修整平,然后将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。
石蜡包埋介绍脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-I 5-10min-II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。
甲1苯1胺蓝染色原理:甲1苯1胺蓝是一种常用的人工合成染料,属于醌亚1胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲1苯1胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲1苯1胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。甲1苯1胺蓝染色液由于硼酸盐缓冲液呈强碱性,更利于组织细胞的着色。
叶片内分布着大小不同的叶脉,沿着叶片中央纵轴有一条很明显的叶脉称为主脉,其余的叶脉称为侧脉。双子叶植物由主脉向两侧发出许多侧脉,侧脉再分出细脉,侧脉和细脉彼此交叉形成网状,称为网状脉;单子叶植物的主脉明显,侧脉由基部发出直达叶尖,各叶脉平行,称为平行脉。一些低等的被子植物、蕨类植物和裸子植物叶脉作二叉分枝,植物石蜡切片三维重构技术服务,形成叉状脉,是比较原始的叶脉。
叶片又可以分为叶尖、叶基、叶缘等部分,每种植物叶片的形态特征可作为识别植物的依据之一。
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