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武汉贝科新肽(多图)-染色体原位杂交

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而是对完整的斑马鱼胚胎进行探针杂交及检测,从整体上把握探针的结合部位,染色体原位杂交,然后对胚胎进行切片,以确定探针结合的具体位置。整胚原位杂交在斑马鱼分子生物学研究中是一种非常重要的实验方法,原位杂交的探针可以是同位素的探针,用自显影来检测;也可以是非同位素的探针,通过荧光或酶法予以检测。我们这儿所介绍的一种原位杂交的方法是通过后者,以标记探针,然后用酶联的方法进行检测。

植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面:

1. 制备组织样品:从植物中取出需要研究的组织样品,如根、茎、叶等。

2. 固定组织样品:将组织样品固定在载玻片上,通常使用或乙醇等化学物质进行固定。

3. 处理组织样品:对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理,以便于DNA探针的穿透和结合。

4. 制备DNA探针:根据需要研究的基因序列,设计并合成DNA探针。DNA探针可以标记荧光染料或性同位素,以便于检测。

5. 杂交DNA探针:将DNA探针与组织样品进行杂交,通常需要在高温下进行,以便于DNA探针与RNA或DNA结合。

6. 检测杂交信号:通过荧光显微镜或计数器等设备,检测DNA探针与RNA或DNA的结合情况,确定目标基因的表达模式和位置。

RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体(Hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位杂交技术经不断改进,其应用的领域已远超出DNA原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已成为有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mRNA表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

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