适用场景
1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;
2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;
3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;
5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;
6、绘制蛋白质相互作用图谱。
酵母双杂交技术的优点
1、无需纯化蛋白;
2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;
3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;
4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。
tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡,是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现,细胞凋亡与多种疾病密切相关,如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力,利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断,疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的链霉亲和素streptavidin特异性结合,后者又与POD底物H2O2、二氨1基联1苯1胺(DAB)产生深棕色反应,特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3‘-OH形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价,以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。
后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),分子病理技术服务,含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
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