为什么不先对一个基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?
不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。
为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮?
不同物种的细胞可能对基因表达有影响,当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时,可以考虑换一种受体材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生质体中无法观察到荧光,此时可以考虑注射叶片来观察荧光。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,荧光定量,有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种:
荧光法:利用抗原与的特异性结合,在细胞内产生荧光标记,从而确定细胞内抗原的分布位置。
GFP融合蛋白表达法:将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。
亚细胞分离法:通过一定的物理或化学方法,将细胞进行破碎,然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来,再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。
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