据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定3个标志:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)、蛋白标志物(Western Blot, WB)。
外泌体透射电镜TEM鉴定外泌体大小、形态,判断样本是否含有外泌体。
外泌体透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。
检测平台:TecnaiTM G2 Spirit BioTWIN
检测结果:三张透射电镜图片,尽可能体现完整的外泌体形态(如有)
检测周期:10-15个工作日
关于表皮层方面角质形成细胞是表皮层的主要细胞,决定表皮层的厚度,决定皮肤自愈能力的强弱。在皮肤损伤后第三天,成纤维细胞开始产生细胞外基质(包括纤连蛋白,I 型和III 型胶原蛋白等)。同时,上皮细胞开始增殖并向受伤区域边缘迁移,加速伤口闭合,减少皮肤感1染。因此,细胞增殖和皮肤再上皮化对皮肤再生至关重要。研究表明,来自不同来源MSC-exo都可以促进皮肤细胞增殖,并加速表皮再生。体内实验也证明,脂肪间充质干1细胞外泌体(ADSC-exo)可促进角质形成细胞在体外的迁移和增殖,提高皮肤伤口愈合速度,增加表皮的自愈能力。
外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,exo服务,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、NTA检测(粒径及浓度鉴定)、WB(分子标志物)。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。
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