阻断内源性过氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室温避光孵育15min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
预杂交:滴加预杂交液,37°C孵育1h。
杂交:倾去预杂交液,滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6 probe 杂交液,分子病理技术服务,浓度6ng/ul,恒温箱37度杂交过夜。
杂交后洗涤:洗去杂交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加甲酰胺洗涤。
滴加封闭液:滴加封闭血1清(正常兔血1清),室温30min。
滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶(anti-DIG-HRP):倾去封闭液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。
分子病理检测的意义:
通过分子检测协助病理诊断
某些肿1瘤具有特定的分子病理学改变,对于病理常规染色难于诊断的这些肿1瘤,进行分子病理检测可协助得出准确的病理诊断。例如淋巴1瘤的鉴别诊断往往依赖于形态和免1疫组化的综合判断,但有些时候,这些手段也不能满足诊断的需要,这时我们通过IG或TCR基因重排检测,可协助鉴别淋巴细胞的普通增殖和肿1瘤性增殖。
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