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武汉科锐诺生物科技有限公司
主营：外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务
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外泌体分离提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速离心法；
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；
2、基于PEG沉淀原理的试剂盒法；
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；
3、超滤提取法；
适用于细菌培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、NTA检测（粒径及浓度鉴定）、WB（分子标志物）。NTA检测作为外泌体鉴定的经典方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。质量较好，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了保证检测质量，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。
样本准备
1. 提供外泌体悬液即可，未纯化样本也可以上机检测；
注意：NTA仅提供粒径分布情况和颗粒浓度，无法区分外泌体与非外泌体成分；当然也可先利用外泌体特异性标记物进行荧光标记，则可以获知外泌体特定亚群的含量。
2.仪器的检测区间是10^7 particles/ml，且有浓度检测下限，为10^5 particles/ml，进样量不少于2ml；一般来说，会对样本稀释后进样；
我司无法准确建议送样量；检测需要量与样本本身浓度有关，样本浓，则用量小，反之则多，根据检测经验，样本取用量一般在2μl-100μl不等，取用量大于50μl时大多由于样本分泌量过低、提取失败或者对样本有过多稀释。一般建议送样量不低于30μl，如样本珍贵，可联系我司寄回，运费视具体情况收取。
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第2年
