原位杂交杂交液
(一)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及载体DNA或RNA等。
(二)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。
(三)贾酰胺可使杂交温度降低,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。
(四)硫酸葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的。
原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,染色体原位杂交,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。经特定标记的核苷酸链为探针,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检DNA片段或mRNA进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检核酸的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mRNA在胞质中的表达。原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用,例如:
植物学研究:在植物学研究中,原位杂交技术可以用于检测和定位特定基因的表达,研究基因组结构和进化。此外,还可以应用于植物染色体组型分析、基因组印记研究等方面。
微生物学研究:在微生物学领域,原位杂交技术可以用于研究细菌、病毒等微生物的基因表达和定位,以及它们在环境中的分布和相互作用。例如,通过标记特异性探针,可以检测肠道微生物群落中的特定,研究其在人体健康和疾病发生中的作用。
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