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植物组织原位杂交技术服务-科锐诺(推荐商家)

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荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交,通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。

       荧光原位杂交技(fish)实验步骤:

       1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

       2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。

       3、切片:石蜡经切片机切片,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。

       4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min,风干,DEPC水浸泡。

       5、消化:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,植物组织原位杂交技术服务,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

PCR技术是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法。其原理是设计特异引物,在TaqDNA聚合酶催化作用下,经过高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复循环,对某一特定模板的特定区域进行扩增,反应结束后应用凝胶电泳或测序等方法分析产物。因此,该技术可以直接检测疾病组织、细胞中是否存在某种病毒DNA,同时PCR技术还是基因突变检测的前期必备技术。

分子病理诊断在遗传性疾病的诊断和分型方面凸显特长,通过对患者染色体、基因的检测进行遗传病筛查和诊断,并可对家族遗传病的发生进行预测。目前,国内主要通过染色体核型分析、荧光原位杂交技术、荧光定量PCR技术等检测染色体畸形,辅助进行产前遗传性疾病的筛查。通过DNA直接测序、荧光定量PCR、免1疫组化技术等检测相关基因的结构、表达的变化,辅助进行神经系统、生殖系统等遗传性疾病的诊断。

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