NTA可以提供样本中颗粒的粒径分布和绝1对浓度,但不能够以NTA所提供的浓度数值这个单一的指标来定量外泌体。首先,外泌体鉴定检测,我们必须理解NTA检测原理:该技术基于布朗运动,通过视频分析颗粒计数,可同时获取样本中颗粒的粒径和绝1对浓度。
因此,样本中的所有颗粒,都会被侦测并计入,而不能筛选出外泌体单独进行计数;同理:也不能通过NTA所提供的粒径分布情况这个单一的指标判断所提取出的内容物就是外泌体;例如下图为常见的粒径浓度分布图,可以说明所提取的内容物是在外泌体粒径范围内,但是否为外泌体还需要结合其他方法综合验证,譬如:透射电镜、western blot等。
抗原提呈中外泌体的作用
树突状细胞是免1疫系统中分泌外泌体活跃的细胞。树突状细胞是抗原提呈细胞的一种,能通过吞噬入1侵体内的细菌等异物,在切断抗原肽后,与 MHCⅡ类分子结合并提呈在细胞表面来激1活T细胞。细胞内的抗原肽利用MHCⅠ类分子提呈,树突状细胞分泌的外泌体携带MHCⅠ类和Ⅱ类分子,它们分别与抗原特异性CD8+ 细胞杀伤性T细胞、CD4+ 辅助T细胞的T细胞受体结合,在远离树突状细胞处也可以激1活T细胞。
外泌体电镜检测:外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。
透射电镜作为鉴定外泌体的金标准,一直是科锐诺生物主营的业务之一。透射电镜点分辨率可以达到0.1nm,非常适合用来观察外泌体类囊泡。客户只需要寄送新鲜或者冻存的外泌体样品,我们负责从制片到观察的全套检测服务。经过多年实操与研发经验,科锐诺已经熟练掌握外泌体电镜检测。做过的样品来源包括:常规细胞上清、外周血、尿液、脑脊液、肺泡灌洗液、组织提取液、乳液、汗液等来源的外泌体。分离方法包括:PEG沉淀法、蔗糖密度梯度离心法、差速超1速离心法、色谱柱法、亲合法、超滤法、切向流、微流控等。对于不同来源,不同方法的样品,实验前,会进行详细沟通及结果预估。结合NTA数据,电镜效果非常可靠且可控。 测试周期为3-7个工作日。
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