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武汉贝科新肽科技有限公司
主营：原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
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一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。
2） 置换成30％的PBST溶液，放置5分钟
3） 置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次
4） 置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟
5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。
蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。
2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。
4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。
生物领域应用原位杂交技术的例子：
物种进化与系统发生学研究：在物种进化与系统发生学研究中，原位杂交技术可以用于检测物种之间的亲缘关系和进化历程。例如，可以比较不同物种之间特定基因序列的差异，进而研究它们的亲缘关系和进化历程。
原位杂交技术在基因表达和调控、细胞分化与发育、研究和物种进化与系统发生学等领域都有广泛的应用价值，为深入探究生命现象、促进生物技术的发展提供了有力的技术支持。
植物原位杂交的应用包括：
研究基因表达：通过观察荧光信号的位置和数量，可以确定目标基因在植物组织中的表达模式和位置。
染色体定位：将目标基因与染色体中的特定位置进行比较，可以确定目标基因在染色体中的位置和分布。
基因：通过原位杂交技术，荧光原位杂交，可以确定目标基因的序列和位置，为基因提供重要的参考信息。
检测物种或品种特异性：通过原位杂交技术可以检测出不同物种或品种之间基因表达的差异，从而为物种或品种特异性研究提供依据。
遗传育种：通过原位杂交技术可以检测出不同品种之间基因表达的差异，从而为遗传育种提供重要的参考信息。
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第2年
