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武汉贝科新肽科技有限公司
主营：原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选
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组织原位杂交(Tissue in situ hybridization），即原位杂交组织化学技术和原位杂交细胞化学技术
原位杂交技术的基本原理
利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。
1.两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA双键分子
2.应用带有标记的（有性同位素，如3H、35S、32P，荧光素、生物素、等非性物质)DNA或RNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内待测核酸(RNA或DNA）片段进行杂交
3.用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位
用原位杂交术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。
此方法有很高的敏感性和特异性，荧光原位杂交，可进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
预杂交
1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。
2）用等体积的HYB＋取代HYB－。
3）60℃水浴，预杂交4小时以上。
杂交
1）吸去预杂交的HYB＋，加上100ul已加入探针的HYB＋溶液（探针浓度约为1ng/ul）..
2）60℃ 温浴过夜。
注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。
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第2年
