原位杂交技术的定义和基本原理原位杂交技术是一种基于核酸分子杂交原理,将标记的核酸探针与生物组织或细胞中的DNA或RNA进行特异性结合,染色体荧光原位杂交,从而在细胞水平上检测目标核酸序列分布的技术。原位杂交技术的基本原理是利用DNA或RNA的互补性,通过加热或化学反应使探针与组织或细胞中的目标核酸序列形成双链复合物,进而实现目标核酸序列的定位。
同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下,如果操作没有得到理想的结果,是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针,还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本,处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素:温度、光照、湿度和试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响着荧光染料的强度,所以探针要避光保存,其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存;各种试剂pH也要达到要求,这也直接关系到原位杂交的稳定性。
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