适用场景
1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;
2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;
3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;
5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;
6、绘制蛋白质相互作用图谱。
酵母双杂交技术的优点
1、无需纯化蛋白;
2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;
3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;
4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。
阻断内源性过氧化物酶:滴加3%1甲1醇-H2O2,室温避光孵育15min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
预杂交:滴加预杂交液,37°C孵育1h。
杂交:倾去预杂交液,滴加含探针has-circ-ST6GALNAC6 probe 杂交液,浓度6ng/ul,恒温箱37度杂交过夜。
杂交后洗涤:洗去杂交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室温洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加甲酰胺洗涤。
滴加封闭液:滴加封闭血1清(正常兔血1清),室温30min。
滴加鼠抗地1高辛标记过氧化物酶(anti-DIG-HRP):倾去封闭液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min,后PBS洗3次×5min。
分子病理检测的意义:
通过分子检测协助病理诊断
某些肿1瘤具有特定的分子病理学改变,对于病理常规染色难于诊断的这些肿1瘤,进行分子病理检测可协助得出准确的病理诊断。例如淋巴1瘤的鉴别诊断往往依赖于形态和免1疫组化的综合判断,水稻原位杂交检测服务,但有些时候,这些手段也不能满足诊断的需要,这时我们通过IG或TCR基因重排检测,可协助鉴别淋巴细胞的普通增殖和肿1瘤性增殖。
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