原位杂交杂交液注意事项:
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等。
(2)杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。甲酰胺可使Tm降低,杂交液中含每1%的甲酰胺可分别使RNA:RNA,RNA:DNA,DNA:DNA的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的甲酰胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。硫酸葡聚糖能与水结合,分子病理技术服务,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链核酸探针)。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体DNA或RNA等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特异性结合,以减低背景。
应用于分子病理诊断的DNA测序技术有直接测序法和焦磷酸测序法。直接测序技术主要是Sanger等发明的双脱氧链末端终止法。其原理就是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生A、T、C、G4组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得DNA序列。直接测序法是基因突变检测的“金标准”,其优点是结果准确,重复性好,可检测整个测序范围内已知和未知突变点;缺点是步骤多,耗时长,灵敏度低,过程不易控制,在检测已知突变位点方面将逐渐被荧光定量PCR法替代。 分子病理技术服务-武汉科锐诺由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是从事“外泌体,透射电镜,扫描电镜,石蜡切片等技术服务”的企业,公司秉承“诚信经营,用心服务”的理念,为您提供更好的产品和服务。欢迎来电咨询!联系人:王经理。温馨提示:以上是关于分子病理技术服务-武汉科锐诺的详细介绍,产品由武汉科锐诺生物科技有限公司为您提供,如果您对武汉科锐诺生物科技有限公司产品信息感兴趣可以联系供应商或者让供应商主动联系您 ,您也可以查看更多与技术合作相关的产品!
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