原位末端凋亡检测(Tunel)
实验原理: TUNEL技术可对组织或细胞中凋亡小体或单个凋亡细胞进行染色,能准确反映细胞凋亡典型的生物化学和形态特征。凋亡细胞内内源性核酸内切酶被而将自身染色体DNA切断成缺口或3-OH末端片段这一特点,利用脱氧核苷酸末端转移酶将标有标记物(如,生物素或荧光素)的脱氧核苷酸转移到3-OH末端,再用组化法或荧光检测凋亡细胞。
分子病理诊断的临床应用将会进一步扩展经典病理学诊断的内涵,将传统的形态诊断外延到肿1瘤发生易感性、基因与染色体变化、基因路径与基1因治1疗、生物学行为评估、对药1物治1疗反应的评价、临床预后的预测等医1疗全过程之中。 分子病理学是与分子生物学、细胞遗传学等学科相互渗透,在蛋白质和核酸等生物大分子水平上研究疾病病因、发病机制、形态变化及功能损害等方面发生1发展规律的新的分支学科,对疾病的病因、发生1发展、发病机制及形态变化,从传统形态学概念深入至分子或基因水平,分子病理已成为肿1瘤病理研究中重要的内容和手段。滴加FITC-TSA:滴加FITC-TSA试剂,避光室温反应5min。后TBST洗3次×10min,PBS洗1次×5min。
DAPI复染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,染色体原位杂交技术服务,发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)
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