提高磷酸钙转染法效率的共通步骤,目的都是为了避免产生会被细胞内吞、加工失效的大颗粒沉淀。
提高转染效率的操作有以下这些:
1、将小分子DNA整合在高分子质量基因组DNA上,以大分子作为运载体,能提高转染效率。
2、测试缓冲液适合的ph,可制备几批pH范围为6.90~7.15的HEPES盐缓冲液,分别测试缓冲效率,找到适pH值。
3、使用转染促进剂,如甘油、氯喹、其他可购买的转染促进剂。因为这些试剂对细胞有一定毒性,因此,应针对每种细胞系通过实验确定转染促进剂处理的佳时机、时长和强度。
除了这些共通的步骤,不同厂家还会对混匀DNA和磷酸钙的速度有要求。有些方法要求只能轻轻搅动,有些建议用移液器温和吹吸混匀,有些则提倡应缓慢混合。
因此,在使用磷酸钙转染时,应针对不同试剂和细胞系,食品级磷酸钙供应商,耐心调整实验参数,才是获得高转染效率的关键。
采取科学合理的施用方法1、集中施和分层施。过磷酸钙可作基肥、种肥和追肥,克拉玛依磷酸钙供应商,但无论作什么肥,都以集中施效果好。
2、与有机肥混合施。与有机肥混合施可减少磷的固定,减少与土壤的接触的同时,能减少有机肥的分解产物与土壤中铁、铝等对磷的固定。
3、制成颗粒肥。把过磷酸钙制成粒径为3~5毫米的颗粒在固定力强的土壤上施用比较有效,能逐渐溶解出有效磷,肥效时间较长
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