直接法
将标记的特异性荧光,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光,室温下干燥后封片、镜检。
间接法
如检查未知抗原,先用已知未标记的特异()与抗原标本进行反应,亚细胞定位公司,用水洗去未反应的,再用标记的抗(第二)与抗原标本反应,洋葱亚细胞定位,使之形成—抗原—复合物,再用水洗去未反应的标记,干燥、封片后镜检。如果检查未知,则表明抗原标本是已知的,洋葱亚细胞定位公司,待检为,其它步骤的抗原检查相同。
细胞膜及内膜系统相关的协同作用
黏着斑激酶(FAK)定位于细胞质黏着斑、细胞核和内体中。在细胞质黏着斑中,湖北亚细胞定位,FAK 通过调控细胞黏着斑的解聚与组装及多个蛋白质的磷酸化从而调节细胞的增殖和迁移。在内体中,FAK 通过 FERM 结构域定位到内体并被。内体中整合素的信号转导时间比质膜上持续的时间更长,并且能够阻止肿1瘤细胞发生失巢凋亡,因此,内体 FAK 可通过抵抗失巢凋亡促进肿1瘤细胞的转移。而在细胞核中,FAK 可导致 p53 的多聚泛素化及降解,从而影响正常细胞的存活和肿1瘤细胞的生长。此外,核 FAK 还能够通过调节细胞的因子和趋化因子的表达促进肿1瘤免疫逃逸的发生。这表明 FAK 在不同亚细胞定位下,与不同的蛋白质协同作用,共同调控肿1瘤的发生和发展。
亚细胞定位原理
利用GFP、RFP等荧光蛋白具有的荧光性质和灵敏性,来示踪细胞内的蛋白。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合,通过瞬转或稳转,使该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器,经过激光共聚焦显微镜激光照射,荧光蛋白会发出荧光,通过观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,从而可以确定目标蛋白的亚细胞定位情况,即可对蛋白质进行准确定位。
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